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      梯度液相色譜儀梯度洗脫時為何產生“鬼峰”

       發布時間:2021-09-22 點擊量:664
         梯度液相色譜儀是目前應用較多的色譜分析方法,液相色譜系統由流動相儲液體瓶、輸液泵、進樣器、色譜柱、檢測器和記錄器組成,其整體組成類似于氣相色譜,針對其流動相為液體的特點作出很多調整。
        梯度洗脫帶來的“鬼峰”來源很多,其中主要來源于流動相和管路,幾乎都有一個共同的機制:
        當流動相具有較高的洗脫強度時,流動相中有紫外吸收的有機雜質在柱上聚焦成組分帶,并隨后在梯度中洗脫。這些流動相雜質的潛在“來源”是廣泛的(如有機相中污染物,水相中污染物,緩沖鹽類,流動相瓶和混合過程產生等)。其他原因包括流動相輸送的物理或機械方面、樣品引入和固定相效應。各種來源的鬼峰,讓鬼峰處理變得非常困難。
        在色譜分離中,縱向擴散會增加分離組分帶寬。等度液相色譜中,盡量在縱向擴散超出接受范圍之前洗脫。在梯度洗脫色譜,因為流動相配比的變化導致動態壓縮組分帶的主動聚焦機制(帶/峰壓縮)。梯度色譜運行,是峰寬擴散和聚焦同步過程的產物。
        聚焦機制可想象一個組分帶廣泛擴散在高效液相色譜柱的頂部。當施加溶劑梯度時,帶后部的有機溶劑濃度總是高于帶前部。帶前的組分分子比帶后的組分分子更強地被固定相保留,帶后的成分分子更快移動,導致落后的組分分子會被更強的洗脫液聚集,并更快地向前移動以趕上其余的。
        帶聚焦機制可聚焦流動相中存在的有機雜質。在低洗脫劑濃度下有一定保留的雜質可能會隨著梯度逐漸聚集成峰。在充分聚焦后,流動相鬼峰與分析物峰形接近或相同,聚焦不完全時,它們會變得更寬或變成其他形狀。理想梯度的液相色譜流動相到達梯度最大,該處應僅包含預期的溶劑和試劑,不包含其他物質。梯度高效液相色譜分析的不只是樣品,也分析流動相的雜質和儀器路徑的溶劑。為了區分真實的分析物峰和這些鬼峰,必須進行空白進樣的檢查(溶劑空白)。

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